SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇技术

作     者：程晓甜 阿地力·沙塔尔 张伟 李新泉 玛依拉 Cheng Xiaotian;Adil Sattar;Zhang Wei;Li Xinquan;Mayila

作者机构：新疆农业大学林学与园艺学院、新疆教育厅干旱区林业生态与产业技术重点实验室乌鲁木齐830052 新疆出入境检验检疫局技术中心乌鲁木齐830083 

基　　金：新疆维吾尔自治区科技计划项目“特色林果重大病虫持续高效绿色防控技术研究”(201130102-3) 新疆维吾尔自治区自治区重点学科森林培育资助项目 新疆维吾尔自治区林业有害生物防治检疫局项目“枣实蝇快速检测和监测技术研发” 

出 版 物：《林业科学》 (Scientia Silvae Sinicae)

年 卷 期：2014年第50卷第4期

页      码：60-65页

摘      要：应用SYBR Green实时荧光PCR技术,建立SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇的方法。利用枣实蝇（mtDNA）中COⅠ基因序列,设计筛选出1对种的特异引物CarF/CarR。引物的特异性分别用桔小实蝇、瓜实蝇、南瓜实蝇、番石榴实蝇和桃果实蝇5种实蝇来验证。SYBR Green PCR实时荧光反应的灵敏度用40,20,10,1,0.1,0.01,0.001 ng·μL^-1 7个浓度枣实蝇DNA模板来检测。结果表明：SYBR Green PCR的检测限度达0.01 ng·μL^-1以下,最适模板DNA浓度为1～20 ng·μL^-1。SYBR Green实时荧光PCR的可靠性可用枣实蝇不同虫态（幼虫、蛹、成虫）的扩增曲线、熔解曲线及PCR产物的琼脂糖凝胶电泳来检验。成虫、幼虫和蛹3种不同虫态的枣实蝇有一致的扩增曲线,熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳条带分别用来确认实时荧光PCR产物的特异性;其平均熔解温度为（75.3±0.1）℃,并获得一段长为205 bp的特异性目标片段,说明在枣实蝇成虫为模板的基础上建立的SYBR Green实时荧光PCR方法同时适用于幼虫、蛹的快速鉴定,可将不同虫态的枣实蝇与近似种类区分开来。

主 题 词：枣实蝇 SYBR Green 实时荧光PCR 溶解曲线 鉴定 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.11707/j.1001-7488.20140409

馆 藏 号：203520045...