雌激素在小鼠表皮发育与人表皮细胞株HaCaT增殖中的作用与机制

作     者：周涛 陈婧 黄宗伟 方利 陈渝 陈雅洁 彭毅志 Zhou Tao;Chen Jing;Huang Zongwei;Fang Li;Chen Yu;Chen Yajie;Peng Yizhi

作者机构：第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 广西医科大学第一附属医院烧伤整形科 

出 版 物：《中华烧伤杂志》 (Chinese Journal of Burns)

年 卷 期：2016年第32卷第5期

页      码：299-304页

摘      要：目的观察雌激素在小鼠表皮发育和Kc（人表皮细胞株HaCaT）增殖中的作用并探讨其机制。方法（1）通过阴道脱落细胞检查法选取5只处于动情期成年C57BL／6小鼠设为动情期组，另将性发育前行卵巢切除的5只成年C57BL／6小鼠设为卵巢切除组。取2组小鼠尾根部全层皮肤，HE染色观测表皮厚度，免疫组织化学染色观察表皮中增殖细胞核抗原（PCNA）阳性细胞分布并计数。（2）取对数生长期HaCaT细胞，用含体积分数10％FBS的RPMI1640培养液培养，按随机数字表法分为阴性对照组、单纯雌二醇组、蛋白激酶B（Akt）抑制剂组、细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂组，每组20孔。各组培养液中，阴性对照组加入1nL二甲基亚砜；单纯雌二醇组加入100nmol／L17 β-雌二醇1 μL；Akt抑制剂组和ERK抑制剂组均加入同前剂量与体积17 β-雌二醇，另分别加入10 μmol／L LY294002和30 μmol／LPD98059各1 μL。分别于培养0（即刻）、24、48、72h，每组取5孔细胞，用细胞计数试制盒8与酶标仪检测细胞增殖活性。（3）取对数生长期HaCaT细胞，同前分组处理，每组3孔。培养72h，用流式细胞仪检测细胞周期分布，计算细胞增殖指数（PI）。（4）取对数生长期HaCaT细胞，同前分组处理，每组3皿。培养72h，蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化ERK（p-ERK）和PCNA蛋白水平。细胞实验均重复3次。对数据行t检验、单因素方差分析、析因设计方差分析、LSD检验。结果（1）卵巢切除组小鼠表皮厚度为（33．5±3．0） μm，明显薄于动情期组的（51．4±3．1） μm（t=20．7，P〈0．01）。2组小鼠PCNA阳性细胞主要集中于表皮基底层；卵巢切除组小鼠表皮中PCNA阳性细胞数为每200倍视野下（37±12）个，明显少于动情期组的每200倍视野下（96±15）个（t：15．3，P〈0．01）。（2）培养0～48h，单纯雌二醇组与阴性对照组细胞增殖活性差异不明显（P值均大于0．05）。培养72h，与阴性对照组比较，单纯雌二醇组细胞增殖活性明显增高（P〈0．01）；Akt抑制剂组、ERK抑制剂组细胞增殖活性均明显低于前2组（P值均小于0．01）。（3）与阴性对照组的（51．6±1．1）％比较，单纯雌二醇组细胞PI明显升高[（58．5±0．8）％，P〈0．05]；Akt抑制剂组、ERK抑制剂组细胞P1分别为（34．9±0．8）％、（48．2±0．4）％，均明显低于前2组（P值均小于0．01）。（4）与阴性对照组的0．566±0．034比较，单纯雌二醇组细胞p-Akt蛋白水平明显升高（1．048±0．077，P〈0．01）；Akt抑制剂组和ERK抑制剂组细胞p-Akt蛋白水平分别为0．682±0．095、0．672±0．019，明显低于单纯雌二醇组（P值均小于0．01）。与阴性对照组的0．469±0．013比较，单纯雌二醇组、Akt抑制剂组、ERK抑制刊组细胞p-ERK蛋白水平均明显升高（1．064±0．089、1．010±0．038、0．778±0．065，P值均小于0．01）。与单纯雌二醇组比较，ERK抑制剂组细胞p-ERK蛋白水平明显降低（P〈0．01）。与阴性对照组的0．386±0．053比较，单纯雌二醇组细胞的PCNA蛋白水平明显升高（0．743±0．043，P〈0．01）；Akt抑制剂组和ERK抑制剂组细胞PCNA蛋白水平分别为0．264±0．019、0．223±0．065，明显低于前2组（P值均小于0．01）。结论雌激素缺乏时，小鼠表皮发育能力减弱。雌激素（17β-雌二醇）可通过激活ERK／Akt信号通路上调PCNA表达，以促进HaCaT细胞的增殖。

主 题 词：雌激素类 表皮 增殖细胞核抗原 细胞外信号调节MAP激酶类 蛋白激酶类 HaCaT细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2016.05.010

馆 藏 号：203520986...