光皮桦EST-SSR PCR反应体系的优化

作     者：陈争 姜小凤 童再康 CHEN Zheng;JIANG Xiao-feng;TONG Zai-kang

作者机构：浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室培育基地浙江临安311300 

基　　金：浙江省重大科技专项(2008C02004-1) 

出 版 物：《浙江农林大学学报》 (Journal of Zhejiang A&F University)

年 卷 期：2012年第29卷第6期

页      码：960-965页

摘      要：为获得稳定的聚合酶链式反应(PCR)产物,采用正交设计L25(56)对光皮桦Betula luminifera表达序列标签-简单重复序列聚合酶链式反应(EST-SSR PCR)反应体系中的5个因素:DNA模板浓度,引物浓度,镁离子(Mg2+)浓度,三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)浓度和DNA聚合酶量进行优化,每个因素设计5个水平。优化试验结果表明:光皮桦EST-SSR最佳PCR反应体系:4.0 mg.L-1DNA模板,0.500μmol.L-1引物,1.250 mmol.L-1Mg2+,0.250mmol.L-1dNTPs,0.072 5×16.67 mkat.L-1rTaq酶。通过梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度。对优化出的EST-SSR PCR反应体系进行稳定性检测,结果均能获得稳定、清晰可辨的DNA谱带。

主 题 词：林木育种学 光皮桦 EST-SSR PCR反应体系 正交设计 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0907[农学-草药学] 07[理学] 08[工学] 0829[工学-安全科学与工程类] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

馆 藏 号：203527584...