shRNA稳定转染抑制氯离子通道蛋白1基因的表达对小鼠肝癌细胞的影响

作     者：李荣宽 唐建武 张军 张宇虹 王绍清 王波 王梅 李妙玲 陈文静 金艳玲 王静文 魏元怡 LI Rong-kuan;TANG Jian-wu;ZHANG Jun;ZHANG Yu-hong;WANG Shao-qing;WANG Bo;WANG Mei;LI Miao-ling;CHEN Wen-jing;JIN Yan-ling;WANG Jing-wen;WEI Yuan-yi

作者机构：大连医科大学附属第二医院消化内科辽宁省116023 大连医科大学病理学教研室 大连医科大学附属第二医院超声科辽宁省116023 

基　　金：国家自然科学基金(30772468) 

出 版 物：《中华临床医师杂志（电子版）》 (Chinese Journal of Clinicians(Electronic Edition))

年 卷 期：2010年第4卷第6期

页      码：721-727页

摘      要：目的将shRNA稳定转染至小鼠肝癌细胞株Hca-F中,使得氯离子通道蛋白1(CLIC1)基因表达抑制,观察肿瘤细胞的增殖、细胞周期、凋亡情况以及迁移能力的变化。方法设计并合成理论上最佳的shRNA序列,进而将其插入pGPU6/GFP/Neo质粒中,经测序和双酶切验证载体构建成功后以梭华-Sofast将DNA质粒稳定转染至小鼠肝癌细胞株Hca-F中,经Real-timeRT-PCR验证CLIC1mRNA表达下调后,应用CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测干扰前后的Hca-F细胞,对比观察细胞的增殖、细胞周期和凋亡情况的变化,应用Transwell小室检验其迁移能力的变化。结果 pGPU6/GFP/Neo-shRNA对CLIC1mRNA抑制效果明显,抑制率达57%。经该表达质粒的干扰后,Hca-F细胞的增殖能力明显增强,停留于G2/M期的细胞明显增多,凋亡细胞显著减少,Transwell小室中穿膜细胞数量明显减少。结论 CLIC1基因具有抑制小鼠肝癌细胞的增殖和促进其凋亡的作用,并且参与细胞周期中G2/M期的调节,同时能够促进肿瘤细胞的迁移。

主 题 词：癌,肝细胞 细胞增殖 细胞凋亡 细胞运动 RNA 干扰 小鼠 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/cma.j.issn.1674-0785.2010.06.006

馆 藏 号：203531066...