Stx2B与IntiminC300融合蛋白的构建、表达及免疫保护研究

作     者：易勇 邹全明 程建平 毛旭虎 童文德 曾明 朱永红 马颖 王庆旭 Yi Yong;ZOU Quan-ming;CHENG Jian-ping;MAO Xu-hu;TONG Wen-de;ZENG Ming;ZHU Yong-hong;MA Ying;WANG Qing-xu

作者机构：第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038 中国药品生物制品检定所 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2005年第25卷第3期

页      码：227-233页

摘      要：目的　构建表达肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O1 57∶H7志贺毒素Ⅱ结合亚单位 (Stx2B)与紧密黏附素C 端免疫保护性片段 (IntiminC30 0 )的融合蛋白 (Stx2B IntiminC30 0 ) ,并观察其免疫保护作用。方法　设计引物采用PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增Stx2B的编码基因stx2b ,T A克隆后在前期已构建原核表达质粒 pET 2 8a( + ) eaeC30 0的基础上构建融合基因表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0 ,经测序鉴定后转化E .coliBL2 1 (DE3) ,IPTG诱导表达 ,PAGE检测 ;通过包涵体洗涤与阴离子柱层析纯化 ,获得目的蛋白Stx2B IntiminC30 0 ,以Al(OH ) 3为佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠 ,再以EHECO1 57∶H7超声破菌液腹腔注射免疫后的小鼠 ,观察攻毒保护效果。结果　PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增出了约 2 90bp的目的片段 ;原核表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0经酶切及测序鉴定与设计序列一致。转化E .coliBL2 1 (DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约 2 5% ;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量 (Mr)约 4 3× 1 0 3,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达。纯化后目的蛋白Stx2B IntiminC30 0的纯度达 75% ,免疫BALB/c小鼠后血清特异性抗体阳转率及抗体效价均显著增高 ,能够抵御致死剂量EHECO1 57∶H7超声破菌?

主 题 词：融合蛋白 O157:H7志贺毒素 保护研究 BALB/c小鼠 表达及 BL21(DE3) 肠出血性大肠杆菌 原核表达质粒 EHEC 免疫保护性 基因组扩增 免疫保护作用 基因表达质粒 E.coli E.coli 相对分子质量 免疫保护效果 PCR法 PAGE T-A克隆 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j:issn:0254-5101.2005.03.018

馆 藏 号：203531757...