肝细胞生长因子mRNA实时荧光定量PCR检测体系的建立及其在淋巴瘤诊断中的价值

作     者：岑东 吕建新 裴仁治 涂植光 余晓林 文阳安 CEN Dong;L(U) Jian-xin;PEI Ren-zhi;TU Zhi-guang;YU Xiao-lin;WEN Yang-an

作者机构：重庆医科大学医学检验系400016 教育部临床检验诊断学省部共建重点实验室400016 温州医学院 浙江省医学遗传学重点实验室 浙江省鄞州人民医院血液科 

基　　金：浙江省自然科学基金(ZB0202) 浙江省宁波市医学科技基金(2003079) 

出 版 物：《中华检验医学杂志》 (Chinese Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2008年第31卷第4期

页      码：384-388页

摘      要：目的 构建肝细胞生长因子（HGF）mRNA定量标准，建立实时荧光定量（FQ）-PCR检测体系，探讨其检测淋巴瘤的应用价值。方法 提取总RNA，行逆转录（RT）-PCR，获HGF cDNA目标片段并构建重组质粒，作为定量标准。设计第二引物对和探针，确定扩增条件，优化组分浓度，建立HGF mRNA实时FQ-PCR检测体系，并定量检测47例淋巴瘤患者[霍奇金病（HD）11例，非霍奇金淋巴瘤（NHL）36例；治疗后，获缓解34例，未缓解13例]和19例非肿瘤患者的淋巴组织标本中HGF mRNA表达。同时，用受试者工作特征（ROC）曲线法，评价其在淋巴瘤诊断中的敏感度和特异度。结果 本研究构建的HGF mRNA定量标准和实时FQ-PCR检测体系的标准曲线斜率为-3．513，相关系数为0．999，扩增效率达92．6％；批内、日内和日间变异系数分别为2．1％、4．0％和6．8％；灵敏性达2拷贝／μl。HGF mRNA在淋巴瘤组的表达（6．425±2．172）显著高于非肿瘤对照组（0．317±0．192，t=15．883，P〈0．001），缓解组的表达（6．157±1．712）显著低于未缓解组（7．591±1．184，t=2．768，P〈0．05），但在HD组和NHL组的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。ROC曲线提示，当临床诊断临界值为3．316时，HGF mRNA对淋巴瘤诊断的敏感度和特异度分别为93．6％和100％。结论 本研究成功构建了HGF mRNA的定量标准和实时FQ-PCR检测体系，并可用于淋巴瘤的HGF mRNA定量检测。

主 题 词：淋巴瘤 肝细胞生长因子 聚合酶链反应 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1009-9158.2008.04.006

馆 藏 号：203532669...