猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白的高效表达及间接ELISA方法的建立

作     者：夏平安 尹彦涛 李素平 党占国 王建举 王中明 李伟娟 崔保安 XIA Ping-an;YIN Yan-tao;LI Su-ping;DANG Zhan-guo;WANG Jian-ju;WANG Zhong-ming;LI Wei-juan;CUI Bao-an

作者机构：河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2009年第29卷第5期

页      码：537-541页

摘      要：根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株ATCC VR2332的N蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从PRRSV Hn-1/06株中克隆了大小为372bp的N蛋白基因(EU025136)。将N蛋白基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-N,在IPTG的诱导下成功表达了相对分子质量约为33000的可溶性融合蛋白N-His;经SDS-PAGE和凝胶薄层扫描分析,融合蛋白的表达量约占细菌总蛋白量的29%。将融合蛋白加入镍琼脂糖凝胶树脂层析柱,经300mmol/L咪唑磷酸盐缓冲液洗脱,其纯度可达91%。用Western blotting分析纯化后的融合蛋白,显示良好的生物学活性。利用纯化融合蛋白作包被抗原及优化ELISA反应条件,建立了可检测抗PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法(N-ELISA),并将所建立的N-ELISA与国外进口的PRRS检测试剂盒IDEXX-ELISA对200份临床送检血清进行平行检测,阳性符合率为92.7%。结果表明,本试验建立的N-ELISA与IDEXX-ELISA具有同样高的特异性。

主 题 词：PRRSV N蛋白 原核表达 ELISA 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2009.05.003

馆 藏 号：203533153...