Notch1-NICD胞内结构域真核表达载体的构建及其初步功能分析

作     者：巩天晓 刘红涛 鲁照明 许培荣 薛乐勋 GONG Tianxiao;LIU Hongtao;LU Zhaoming;XU Peirong;XUE Lexun

作者机构：郑州大学第一附属医院细胞生物学研究室郑州450052 郑州大学第二附属医院肿瘤科郑州450014 郑州大学生物工程系细胞生物学研究室郑州450001 

基　　金：教育部“十五”“211工程”重点学科建设项目2002-2 河南省医学科技攻关计划项目20050009 

出 版 物：《郑州大学学报（医学版）》 (Journal of Zhengzhou University(Medical Sciences))

年 卷 期：2009年第44卷第3期

页      码：468-472页

摘      要：目的:构建包含Notch1胞内结构域的Notch1-NICD真核表达载体及绿色荧光蛋白载体并转染食管鳞状细胞癌细胞株EC9706及Eca109,并对Notch1-NICD1在食管鳞状细胞癌中的功能进行初步探索。方法:根据GenBank上的Notch1-NICD序列设计扩增引物,由RT-PCR扩增NICD片段,测序鉴定,并通过Blast进行序列比对,然后回收目的片段并与真核表达载体pcDNA3.1(+)相连,构建Notch1-NICD真核表达载体pNotch1-NICD1,同时将扩增的NICD与pEGFP-C1载体相连构建绿色荧光蛋白表达载体pENotch1-NICD1,并转染EC9706及Eca109,观察Notch1在细胞中的定位及其途径的激活状态。同时将pNotch1-NICD1真核表达载体转染EC9706及Eca109,用MTT法分别在24h、48h、72h、96h及120h观察外源性Notch1片段的导入对EC9706及Eca109细胞增殖的影响。结果:通过RT-PCR获得1个Notch1胞内区片段,并成功构建了包含Notch1胞内区结构域的绿色荧光蛋白载体及真核表达载体。转染pENotch1-NICD1后,Notch1在胞质和胞核内均有表达,表明Notch1信号通路被激活。此外,MTT结果表明转染Notch1-NICD1片段的食管鳞状细胞癌细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05)。结论:成功构建了Notch1绿色荧光蛋白表达载体及pcDNA3.1(+)真核表达载体。外源Notch1片段的引入能够明显抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞状细胞癌的一个潜在的分子靶点。

主 题 词：Notch1信号途径 食管鳞状细胞癌细胞 细胞增殖 真核表达载体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-6825.2009.03.003

馆 藏 号：203533183...