利用套叠PCR技术合成人胰岛素原基因的临床研究

作     者：马建忠 周贤婧 王永刚 Ma Jianzhong;Zhou Xianjing;Wang Yonggang

作者机构：兰州理工大学生命科学与工程学院730050 

基　　金：甘肃省自然科学基金资助项目 项目编号(3ZS062-B25-O23) 

出 版 物：《中国现代医药杂志》 (Modern Medicine Journal of China)

年 卷 期：2010年第112卷第2期

页      码：8-11页

摘      要：目的设计并分子克隆适宜于大肠杆菌表达系统的人胰岛素原基因。方法以美国国家基因库(GenBank)发布的人胰岛素原的氨基酸序列为模板,参考大肠杆菌表达系统的密码子偏好性以及所用表达载体(pGEX-3x)的特点,经计算机分析、设计人胰岛素原基因为8个寡核苷酸片段,以重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术体外延伸获得完整的人胰岛素原基因,分子克隆后测定所得基因的核苷酸序列。结果经限制性内切酶分析确定为重组克隆的质粒进行核苷酸序列分析,结果表明,我们所克隆的基因序列完全符合我们先前的设计。结论SOE-PCR技术可用于体外寡核苷酸片段的延伸并获得完整长度的基因。TaqDNA聚合酶延伸反应前以Klenow片段处理可提高较短覆盖末端或较低专一性末端正确延伸的成功率。

主 题 词：套叠PCR(SOE-PCR) 人胰岛素原 Klenow片段 基因克隆 

学科分类：1007[医学-药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-9463.2010.02.003

馆 藏 号：203533462...