甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒的制备

作     者：李利 杨秀云 邹墅 张雪梅 李晓波 李玉香 吴东林 李静 杨文冲 杜丽娜 李勇 LI Li;YANG Xiu-yun;ZOU Shu;ZHANG Xue-mei;LI Xiao-bo;LI Yu-xiang;WU Dong-lin;LI Jing;YANG Wen-chong;DU Li-na;LI Yong

作者机构：长春博德生物技术有限责任公司长春130012 吉林大学第一临床医院感染症科长春130021 长春生物制品研究所长春130062 吉林省疾病预防控制中心长春130021 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2010年第23卷第7期

页      码：751-754页

摘      要：目的制备甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒,并进行验证。方法采用磁珠法从甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品中提取病毒RNA,逆转录合成cDNA。根据NCBI最新公布的大流行甲型H1N1流感病毒(2009)基因序列,设计针对编码基质蛋白M基因的引物和探针,检测甲型流感病毒;设计针对血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因特异性的引物和探针,检测甲型H1N1流感病毒;同时针对人的RNaseP基因设计用于内部控制的引物和探针。所有探针均为Taqman探针,5 端标记FAM,3 端标记BHQ1。对最佳荧光PCR反应条件进行优化,在此基础上组装成甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒,对其特异性、灵敏度、精密性和稳定性进行验证。与市售试剂盒的检测结果进行对比,并对63份临床甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品进行检测。结果设计的PCR引物及探针能对甲型H1N1流感病毒进行准确检测,与流感病毒的其他型和亚型无交叉反应;试剂盒的灵敏度为0.004个血凝素单位;试验内变异系数小于2.5%,批间变异系数小于5%;试剂盒放置-20℃保存,稳定性良好;检测20份甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品的结果与市售试剂盒一致;检测63份流感疑似患者咽拭子样品,其中大流行甲型H1N1流感病毒阳性36份,普通甲型流感病毒阳性5份。结论所制备的甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒具有较高的灵敏度、特异性、精密性和稳定性,可用于目前流行的甲型H1N1流感病毒的快速检测。

主 题 词：流感病毒A型,H1N1亚型 实时荧光PCR 试剂盒,诊断 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13200/j.cjb.2010.07.84.lil.021

馆 藏 号：203533638...