降落PCR及克隆测序法检测DNA甲基化的实验研究

作     者：宗飒 苏健 陈世良 谢至 黄迎 陈志红 唐红艳 张绪超 吴一龙 ZONG Sa;SU Jian;CHEN Shiliang;XIE Zhi;HUANG Ying;CHEN Zhihong;TANG Hongyan;ZHANG Xuchao;WU Yilong

作者机构：广东省肺癌研究所 广东省医学科学院广州510080 广东省人民医院医学研究中心 

出 版 物：《实用肿瘤学杂志》 (Practical Oncology Journal)

年 卷 期：2010年第24卷第4期

页      码：385-389页

摘      要：目的探索优化PCR及测序法检测DNA甲基化的实验条件，检测肺癌hsa—mir-34b（mir-34b）基因启动子DNA甲基化谱。方法肺癌细胞株A549 DNA进行亚硫酸盐处理后，设计引物扩增mir-34b基因启动子序列，使用普通PCR、巢式PCR和降落（Touchdown）PCR方法以及不同DNA聚合酶进行扩增，甲基化谱检测采用PCR直接测序和克隆后测序两种方法。结果降落PCR与巢式PCR方法相结合优于普通PCR及单独的巢式PCR或降落PCR。HotStart酶优于普通Taq酶及ExTaq酶。直接PCR测序法的测序图普遍出现套峰难以判读，PCR产物克隆后测序可见清晰的测序峰，甲基化位点可明确判读，并可以结合测序克隆数目提高甲基化检测敏感度。结论对于重亚硫酸盐处理的DNA甲基化状态检测，推荐使用HotStart酶、降落PCR与巢式PCR相结合、克隆测序法检测基因甲基化谱，序列图明确且敏感度高。

主 题 词：降落PCR DNA甲基化 克隆测序 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-3070.2010.04.024

馆 藏 号：203533678...