绵羊肺腺瘤病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：斯日古楞 么宏强 马学恩 王升启 Siriguleng;YAO Hong-qiang;MA Xue-en;WANG Sheng-qi

作者机构：内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国军事医学科学院北京100850 

基　　金：国家自然科学基金(30260083 31060332) 教育部高等学校博士点专项研究基金(20040129001) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2011年第43卷第7期

页      码：6-11页

摘      要：为建立检测绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)实时荧光定量PCR(Real-time qPCR)方法,根据外源性JSRV-NM株env基因序列,选其保守序列作为目的片段,设计引物和TaqMan探针,以自然病例的肺肿瘤组织基因组DNA为模板,经PCR扩增目的基因、克隆,重组质粒鉴定,并严格定量后,梯度稀释作为阳性标准品,优化反应条件进行Real-time qPCR扩增,获得的标准曲线为:Y=-3.308X+47.848,线性相关系数为0.991;Ct值变异系数小,并且灵敏度高,初步建立了检测JSRV前病毒DNA的Real-time qPCR方法。应用该方法对不同来源(A、B、C、D、E组)的绵羊外周血及其他组织样品进行测定其前病毒载量。结果显示B组和C组外周血白细胞、肺脏、肺门淋巴结以及鼻液中检测均为阳性,并发现前病毒DNA的载量在肺脏中明显高于外周血白细胞;D组虽未发现有绵羊肺腺瘤(SPA)临床症状,但在肺门淋巴结里可以检测到;E组中1只绵羊的肺脏也检出低拷贝数的前病毒DNA,而在A组中检测结果均为阴性。本研究对检测未知羊群JSRV感染程度及研究SPA流行病学等均有重要意义。

主 题 词：绵羊肺腺瘤病毒 实时荧光定量PCR TaqMan探针 前病毒DNA 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203534058...