miR-126报告基因载体的构建及其功能鉴定

作     者：虢灿杰 卞兆连 盛黎 马雄 

作者机构：上海交通大学医学院附属仁济医院消化所及消化科上海200127 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金项目(81100296) 上海市青年科技启明星计划项目(13QA1402500) 

出 版 物：《现代生物医学进展》 (Progress in Modern Biomedicine)

年 卷 期：2014年第14卷第5期

页      码：801-804页

摘      要：目的:根据miR-126的预测靶点构建荧光素酶报告基因重组质粒,并进行功能鉴定。方法:利用sanger数据库提供的miR-126靶序列设计引物,PCR扩增目的微小RNA(microRNAs,miRNAs)靶基因3 非编码区(three-prime untranslated regions,3 UTRs)序列,PCR产物双酶切,后连入经过同样双酶切的pGL3-control载体中,连接产物转化大肠杆菌DH5α,进行阳性克隆鉴定。同样,将候选靶基因3 UTRs突变,突变型3 UTR克隆入pGL3-control报告载体,构建野生型和突变型的报告基因重组质粒。将野生型和突变型的报告基因载体分别和化学合成的microRNA以及内参质粒共转染293TN细胞,进行双荧光素酶检测。结果:成功构建miR-126报告基因野生型和突变型重组质粒pGL3-VEGF-A-3 UTR和pGL3-VEGF-A-3 UTR,质粒测序及酶切结果完全正确。瞬时转染实验显示,过表达miR-126能直接抑制VEGF-A-3 UTRs报告基因活性。结论:miR-126对VEGF-A具有靶向调节功能。

主 题 词：miR-126 荧光素酶报告基因 靶基因 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13241/j.cnki.pmb.2014.05.001

馆 藏 号：203535303...