对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP53B原核表达及抗血清的制备

作     者：姚迁会 覃冰 潘迎捷 王永杰 YAO Qian-Hui;QIN Bing;PAN Ying-Jie;WANG Yong-Jie

作者机构：上海海洋大学食品学院上海201306 农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室上海201306 

基　　金：教育部高等学校博士点基金项目(No.20133104110006) 上海市教委科研创新重点项目(No.14ZZ144) 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2015年第42卷第10期

页      码：1977-1983页

摘      要：【目的】研究对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)囊膜蛋白sVP53B克隆、表达、纯化及抗血清制备。【方法】根据WSSV囊膜蛋白基因序列,设计引物,PCR扩增出功能序列(Svp53B),构建到pET-16b载体后,转化至大肠杆菌Rosetta 2诱导表达,用SDS-PAGE、Western blotting检测优化表达。表达产物采用Ni-NTA琼脂糖磁珠进行纯化、割胶回收融合蛋白,以纯化的Svp53B-his为抗原,免疫兔子获得多克隆抗体,通过间接ELISA检测抗体的效价。【结果】构建重组质粒p ET-16b-Svp53B,在大肠杆菌Rosetta 2中以1 mmol/L IPTG诱导表达量最高,主要以包涵体形式表达。纯化包涵体蛋白免疫兔子,获得多克隆血清,效价达到1:150 000。【结论】原核表达并纯化得到高纯度的WSSV囊膜蛋白s VP53B,制备的兔源多克隆血清亲和力高、特异性好,这对后期进一步研究VP53B与经口侵染相关功能奠定了基础。

主 题 词：对虾白斑综合征病毒 囊膜蛋白 VP53B 原核表达 多克隆血清 

学科分类：0906[农学-水产类] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.13344/j.microbiol.china.150008

馆 藏 号：203536119...