山羊痘疫苗荧光定量效检方法的建立及应用

作     者：张倩 唐娜 王金良 苗立中 胡琳琳 孙翠萍 沈志强 ZHANG Qian;TANG Na;WANG Jin-liang;MIAO Li-zhong;HU Lin-lin;SUN Cui-ping;SHEN Zhi-qiang

作者机构：山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 

基　　金：山东省现代农业产业技术体系羊创新团队(SDAIT09-011-07) 

出 版 物：《山东农业大学学报（自然科学版）》 (Journal of Shandong Agricultural University：Natural Science Edition)

年 卷 期：2015年第46卷第6期

页      码：865-869页

摘      要：为建立灵敏度高,特异性强的山羊痘(GPV)荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并以稳定的标准品替代定量测定山羊痘疫苗半成品中的核酸。针对山羊痘病毒基因组P32基因设计一对特异性引物,构建稳定的标准品,进行敏感性、特异性和稳定性试验,并对本单位的部分批次山羊痘疫苗半成品进行定量检验,与TCID50效检结果相比较寻求相关性。结果表明建立的标准曲线相关系数为0.9995,扩增效率为98%,该方法只扩增山羊痘病毒,不扩增其他病原,能检测到每微升体积中100个DNA模板拷贝数,比山羊痘普通PCR(GPV-n PCR)高一个数量级。制备三批标准品进行重复性试验,结果变异系数在0.43~1.9%之间,稳定性良好。对4批的山羊痘疫苗半成品进行效力检验,TCID_(50)≥10^(4.5)/m L时Ct值为14.51。建立的GPV-FQ-PCR方法能特异性的检测GPV核酸含量,与TCID_(50)测定的结果具有良好的相关性,可用于山羊痘半成品中核酸的定量测定。

主 题 词：山羊痘 疫苗 荧光定量 效力检验 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-2324.2015.06.013

馆 藏 号：203536183...