以反向PCR扩增抗人宫颈癌单克隆抗体重链可变区基因

作     者：王莹 李旭 陈葳 

作者机构：西安交通大学第一医院实验医学中心陕西西安710061 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2002年第18卷第5期

页      码：489-490页

摘      要：单克隆抗体 (ｍＡｂ)Ｖ区ｃＤＮＡ序列的克隆是构建单链抗体 (ＳｃＦｖ)的关键一步[1 ] 。通常是在抗体Ｖ区序列两头 5′和 3′端设计带简并碱基的引物 ,用普通ＰＣＲ法进行扩增[2 ] 。该法虽看似简单 ,但局限性很大 ,若遇到同源性差且复杂的序列 ,则难以获得。同时 ,因带有简并碱基 ,可使ＰＣＲ产物不纯 ,而影响蛋白的表达及其功能。我们在构建抗人宫颈癌ＳｃＦｖ过程中 ,用常规ＰＣＲ法扩增出ＶＬｃＤＮＡ序列 ,经多种方法尝试 ,均未获得ＶＨ ｃＤＮＡ序列。随后 ,采用反向ＰＣＲ技术扩增并经测序证明 ,确为ＶＨ ｃＤＮＡ序列 ,为重组制备ＳｃＦｖ奠定了基础。1　材料和方法1.1　材料　抗

主 题 词：单链抗体 重链 可变区 反向PCR 宫颈癌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1007-8738.2002.05.025

馆 藏 号：203536441...