罗尼氏弧菌Vibrio shilonii BY新琼胶酶基因的克隆、序列分析及表达

作     者：杨光 叶秀云 林娟 李婧玒 韩尧跃 李仁宽 YANG Guang;YE Xiu-Yun;LIN Juan;LI Jing-Hong;HAN Yao-Yue;LI Ren-Kuan

作者机构：福州大学生物科学与工程学院福建福州350116 福建省海洋酶工程重点实验室福建福州350116 

基　　金：国家海洋公益性行业科研专项项目(No.201305015) 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2015年第42卷第11期

页      码：2133-2142页

摘      要：【目的】从海洋来源的罗尼氏弧菌菌株BY中克隆得到一个具有琼胶酶活性的新基因,并对其进行重组表达。【方法】对实验室保藏的产琼胶酶菌株BY进行16S r RNA基因序列分析,并构建系统发育树。根据已报道的琼胶酶基因序列的同源性,设计简并引物,利用降落PCR(Touch-down PCR)及染色体步移技术扩增琼胶酶基因序列全长,对基因序列进行生物信息学分析。将目的基因插入p ET22a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),对重组酶进行表达,利用DNS法测定了重组酶的酶活,对该重组琼胶酶酶学性质进行研究。【结果】克隆得到一条新的琼胶酶基因,命名为Vibrio ***(Gen Bank登录号:AIW39921.1),Vibrio ***基因序列全长2 232 bp,编码744个氨基酸,理论分子量为85 k D,Vibrio ***的氨基酸序列基因库中与已知的琼胶酶氨基酸序列Vibrio ***3的相似度为86%。发酵液琼胶酶酶活力为71.73 U/m L,证明表达的蛋白为琼胶酶。酶学性质研究表明重组琼胶酶的最适温度及p H分别为50°C和7.0,并且具有较好的稳定性。【结论】利用染色体步移技术克隆得到一条新的琼胶酶基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了重组表达,为琼胶酶的应用奠定了基础。

主 题 词：琼胶酶 罗尼氏弧菌 染色体步移技术 表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 071005[071005] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13344/j.microbiol.china.150022

馆 藏 号：203542269...