CYP1A2基因沉默及其对三氯乙烯毒性影响

作     者：徐新云 毛侃琅 毛吉炎 吴德生 秦逍云 杨细飞 张然 周丽 黄新凤 

作者机构：深圳市疾病预防控制中心卫生毒理学重点实验室深圳市现代毒理学重点实验室广东深圳518055 深圳大学生命科学学院518060 

基　　金：深圳市科技计划重点项目(201101015) 

出 版 物：《中国职业医学》 (China Occupational Medicine)

年 卷 期：2013年第40卷第4期

页      码：287-291,296页

摘      要：目的构建细胞色素氧化酶1A2(CYP1A2)基因沉默载体,转染L02人正常肝细胞(简称"L02细胞"),建立CYP1A2沉默细胞株并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响。方法 设计合成短发卡RNA(shRNA),连接到pLKO.1-puro质粒中构建CYP1A2 shRNA慢病毒表达载体,感染L02细胞。筛选CYP1A2沉默细胞株,采用荧光定量聚合酶链式反应和免疫印迹法鉴定。分别采用浓度为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol/L的TCE(设为相应的染毒剂量组)对L02细胞和CYP1A2沉默细胞染毒12 h,同时设置二甲基亚砜溶剂对照组(即0.00 mmol/L染毒剂量组),观察凋亡基因[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9]和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)等基因表达的变化。结果 测序证明插入pLKO.1-puro载体的CYP1A2基因干扰序列与设计的shRNA序列一致。CYP1A2沉默细胞的CYP1A2 mRNA和CYP1A2蛋白相对表达水平分别较L02细胞下降75.9%和82.4%(P<0.01)。TCE染毒后,0.25～4.00 mmol/L 4个染毒剂量组CYP1A2沉默细胞Bcl-2表达水平均高于相应染毒剂量组L02细胞(P<0.01);部分0.25～4.00 mmol/L染毒剂量组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和c-fos、c-myc、k-ras、p53相对表达水平均低于相应染毒剂量组的L02细胞(P<0.05或P<0.01)。结论 CYP1A2沉默降低TCE对L02细胞凋亡基因和癌基因的活化作用。

主 题 词：肝细胞 细胞色素氧化酶1A2 细胞色素1A2基因沉默细胞 三氯乙烯 凋亡基因 癌基因 

学科分类：100405[100405] 0710[理学-生物科学类] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

D　O　I：10.11763/j.issn.2095-2619.2013.04.001

馆 藏 号：203542576...