莱姆病螺旋体优势抗原BmpA分子克隆、高效表达与亚细胞地位

作     者：宝福凯 赖名耀 文霞 董坚 柳爱华 陈明清 

作者机构：昆明医科大学热带医学研究所云南昆明650500 昆明医科大学第一附属医院云南昆明650031 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81060134) 云南省自然科学基金项目(No.2007C069M 2010CD221 2011FB244) 云南省教育厅科学研究基金项目(No.08Y0240) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2012年第7卷第11期

页      码：801-806页

摘      要：目的以伯氏疏螺旋体标准株B31株基因组DNA为模板,PCR扩增bmpA全基因序列,定向克隆和高效表达重组BmpA并纯化。方法 1)以伯氏疏螺旋体标准株B31株基因组DNA为模板,设计定向克隆引物,PCR扩增bmpA全基因序列,定向克隆入表达载体pGEX-6p-1,酶切鉴定后转化大肠埃希菌BL21菌株,获得bmpA重组菌;2)从重组菌培养温度,诱导时间,诱导剂的剂量,菌密度(A600)等方面优化诱导条件,确定高效表达重组BmpA的最佳方案;3)用GSH柱纯化重组BmpA,探索纯化BmpA的最佳条件。结果 1)在基因水平和蛋白水平上均得到目的条带和目标峰,确定表达载体bmpA-pGEX-6p-1构建成功并表达重组BmpA;2)重组质粒在37℃,IPTG诱导浓度为0.1mmol/L,诱导时间为6h,菌液的A600值为0.5～1.0以及在LB培养基上培养GST-bmpA融合蛋白表达量达到最大;3)在最佳表达条件下1L重组菌能得到2.9～3.1mg纯化BmpA蛋白。结论成功构建了表达重组蛋白BmpA的大肠埃希菌原核表达系统,确定了高效表达重组BmpA的最佳方案,并证明用GSH柱纯化重组BmpA效果较好。

主 题 词：莱姆病 伯氏疏螺旋体 BmpA 分子克隆 高效表达 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.2012.11.001

馆 藏 号：203542996...