RegIα cDNA过表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖凋亡的影响

作     者：周群燕 陆晓凤 王良静 姒健敏 ZHOU Qun-yan;LU Xiao-feng;WANG Liang-jing;SI Jian-min

作者机构：浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室浙江杭州310016 浙江大学医学院附属第二医院消化内科浙江杭州310009 

基　　金：浙江省自然科学基金(Y206280) 浙江省教育厅科研项目(Y20070071) 

出 版 物：《浙江大学学报（医学版）》 (Journal of Zhejiang University(Medical Sciences))

年 卷 期：2010年第39卷第5期

页      码：499-505页

摘      要：目的:构建再生蛋白Iα(regeneration gene Iα,RegIα)的cDNA过表达质粒表达载体,在体外评价其对胃癌细胞株增殖及其凋亡的影响。方法:根据RegIαcDNA的全序列设计引物,用RT-PCR的方法从胃黏膜组织的总RNA中获取RegIα的cDNA编码区域的全序列,经测序其与目的基因序列一致。将获取的RegIα序列经TA克隆和亚克隆至pIRES2-EGFP真核表达质粒载体中;将构建的RegIα过表达质粒载体pIRES2-RegIα-EGFP转染胃癌细胞株MKN28,并用空载体pIRES2-EGFP作为对照,利用G418筛选稳定表达pIRES2-RegIα-EGFP的MKN28细胞株。通过RT-PCR及Western blot检测转染后细胞RegIα在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法和流式细胞仪分别检测RegIα过表达后MKN28细胞增殖及拮抗H2O2诱导凋亡的变化。结果:成功构建RegIαcDNA的全序列表达质粒。RT-PCR及Western blot检测显示:转染pIRES2-EGFP质粒的MKN28细胞RegIαmRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);MTT试验显示:转染后细胞增殖能力明显升高(P<0.05),而且拮抗H2O2凋亡的能力增强(P<0.05)。结论:RegIα的过表达能明显增强胃癌细胞MKN28的增殖和拮抗H2O2诱导凋亡的能力。

主 题 词：胃肿瘤 再生/遗传学 细胞系,肿瘤 逆转录聚合酶链反应 遗传载体 质粒 细胞凋亡 细胞增殖 转染 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3785/j.issn.1008-9292.2010.05.010

馆 藏 号：203543026...