检测伪狂犬病毒gB基因荧光定量PCR方法的建立

作     者：朱淑芬 朱瑞良 乔彩霞 高志强 张利峰 张鹤晓 吴亚琼 王慧珊 

作者机构：山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 北京出入境检验检疫局北京101113 青岛农业大学山东青岛266109 

基　　金：国家科技基础性工作专项"重大动物疫病病原及相关制品标准物质研究"资助项目(2008FY130100) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2012年第32卷第10期

页      码：1413-1417页

摘      要：利用DNAMAN软件对GenBank登录的伪狂犬病病毒(PRV)各毒株gB基因序列进行比对分析,选择其保守区域设计合成特异性的引物和TaqMan探针,同时利用普通PCR技术扩增获得全长的伪狂犬病毒gB基因,并克隆到pMD20-T载体上作为阳性标准品。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了一种快速检测伪狂犬病病毒的荧光定量PCR技术。该检测技术具有较高的灵敏性、特异性和可靠性。对制备的pMD-gB阳性标准品的检测结果表明,所建立的伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR最低检测极限可达1.50×102拷贝/反应;同时相比于普通PCR方法其灵敏度高100～1 000倍以上,并且重复性好。在对60份临床样品的检测中,荧光定量PCR不仅检出了普通PCR检测为阳性的样品,且检出了2份普通PCR未检出的样品,进一步证实了该方法快速、灵敏性好,可用于PRV感染的早期快速定量检测和肉类食品进出口检疫。

主 题 词：伪狂犬病毒 gB基因 荧光定量PCR 检测 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2012.10.034

馆 藏 号：203543108...