葡萄糖苷酶Ⅰ特异性siRNA-EGFP真核表达载体的构建及表达

作     者：李冬青 章晓联 戚中田 Li Dongqing;Zhang Xiaolian;Qi Zhongtian

作者机构：武汉大学医学院免疫学系武汉430071 第二军医大学微生物学教研室上海200433 

基　　金：国家自然科学基金资助项目 (编号:30370310) 湖北省卫生厅资助项目(编号:JX1BO74) 

出 版 物：《武汉大学学报（医学版）》 (Medical Journal of Wuhan University)

年 卷 期：2005年第26卷第2期

页      码：190-193,i002页

摘      要：目的:构建葡萄糖苷酶Ⅰ(glucosidaseⅠ, GluⅠ)特异性siRNA真核表达载体。方法:根据 siRNA靶序列选取原则,设计并合成针对鼠葡萄糖苷酶ⅠcDNA的寡聚DNA,退火并连接至载体 pSilencer1.0 U6,再将 U6 启动子及下游插入片断一起切下,克隆至真核表达载体 pEGFP C1,通过限制性酶切和测序对重组表达载体进行鉴定,最后将该质粒转染至HeLa细胞,共聚焦荧光显微镜观察其表达。结果:①限制性酶切和测序结果表明成功构建了带有EGFP基因的鼠GluⅠ特异性的siRNA真核表达载体 pC 1U6glu; ②共聚焦荧光显微镜观察结果表明p C1U6glu成功转染至HeLa细胞。结论:pC 1U6glu的成功构建及表达为进一步利用 siRNA研究葡萄糖苷酶Ⅰ的功能和治疗肿瘤奠定基础。

主 题 词：葡萄糖苷酶Ⅰ siRNA 真核表达载体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-8852.2005.02.016

馆 藏 号：203547158...