紫椴ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作     者：穆立蔷 刘赢男 冯富娟 杨国亭 Mu Liqiang;Liu Yingnan;Feng Fujuan;Yang Guoting

作者机构：东北林业大学哈尔滨150040 

基　　金：国家林业局野生动植物保护基金资助项目"紫椴保护与救护"(010413256) 

出 版 物：《林业科学》 (Scientia Silvae Sinicae)

年 卷 期：2006年第42卷第6期

页      码：26-31页

摘      要：分别采用单因子试验和正交设计2种方法对影响紫椴ISSR-PCR反应体系的4个因素(Taq酶,Mg2+,dNTP,引物)在3个水平上进行优化试验。正交设计选用L9(34)方案,采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响情况,找出最佳反应水平。2种方法所得影响因素最佳水平存在差异,通过综合比较与分析,最终建立了紫椴ISSR-PCR的最佳反应体系:在20μL的反应体系中,Taq酶1·0U,Mg2+2·0mmol·L-1,dNTP0·20mmol·L-1,引物0·4μmol·L-1,1×PCRbuffer,30ng模板DNA。在此基础上筛选出14个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。

主 题 词：紫椴 ISSR-PCR 正交设计 单因子试验 梯度PCR 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090701[090701] 0907[农学-草药学] 07[理学] 09[农学] 071007[071007] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1001-7488.2006.06.005

馆 藏 号：203547589...