H9N2型禽流感病毒核蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

作     者：胡思顺 李自力 肖运才 刘梅 毕丁仁 许青荣 HU Si-shun;LI Zi-li;XIAO Yun-cai;LIU Mei;BI Ding-ren;XU Qing-rong

作者机构：华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2007年第18卷第6期

页      码：939-941页

摘      要：目的:利用大肠杆菌表达H9N2禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)与GST的融合蛋白并分离纯化,进行动物免疫制备多克隆抗体。方法:根据AIV NP基因序列设计引物,将已经获得的NP基因定向克隆到GST融合原核表达载体pGEX-KG并转化大肠杆菌,在IPTG诱导下获得高效表达。经谷胱甘肽层析柱分离纯化蛋白,制备抗原免疫家兔,得到pGEX-KG-NP多克隆抗体。结果:SDS-PAGE分析显示融合表达蛋白GST-NP相对分子质量约82 000,表达量约占菌体总蛋白的20%。Western-blot和ELISA检测结果表明,重组NP能与鸡抗AIV抗体发生明显的抗原抗体反应。自制的多克隆抗体能特异地与NP相互作用,可用于AIV病原诊断。结论:获得了NP基因的高效表达产物;制备了效价和特异性良好的抗重组NP多克隆抗体。经实验验证表达产物具有活性,多克隆抗体效价高,特异性强,为AIV病原诊断试剂的研发奠定了基础。

主 题 词：禽流感病毒 核蛋白 融合表达 多克隆抗体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2007.06.015

馆 藏 号：203547974...