实时荧光PCR检测17-AAG对人RPE细胞Akt等基因表达的调控

作     者：许志洋 姚家奇 刘庆淮 李建民 Zhi-Ying Xu;Jia-Qi Yao;QingHuai Liu;Jian-Min Li

作者机构：南京医科大学细胞生物学系中国江苏省南京市210029 南京医科大学中心实验室中国江苏省南京市210029 南京医科大学第一附医院眼科中国江苏省南京市210029 

出 版 物：《国际眼科杂志》 (International Eye Science)

年 卷 期：2008年第8卷第9期

页      码：1792-1794页

摘      要：目的:建立检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察17-AAG对人RPE细胞中Akt,Raf,Hsp90,Hsp70基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株。当加入处理因素17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据Akt,Raf,Hsp90,Hsp70的基因序列,设计Akt1,Raf1,Hsp90,Hsp70的引物,利用ABI 7300PCR仪和SYBR Green,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析。结果:熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证明了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,17-AAG可以下调Akt及Raf基因的表达,上调Hsp90及Hsp70基因表达。结论:应用SYBR Green实时荧光PCR可以特异、准确地分析RPE细胞相关增殖基因表达差异,为系统研究17-AAG治疗PVR的复杂调控机制创造有力条件。

主 题 词：SYBR Green 实时荧光PCR 17-AAG 视网膜色素上皮 增生性玻璃体视网膜病变 热休克蛋白90 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100212[100212] 100215[100215] 10[医学] 

馆 藏 号：203548225...