pGL3-Basic-COX-2-promoter报告基因重组质粒的构建及其功能鉴定

作     者：李琦 周利红 王炎 孙珏 高虹 范忠泽 Qi Li;Li-Hong Zhou;Yan Wang;Jue Sun;Hong Gao;Zhong-Ze Fan

作者机构：上海中医药大学附属普陀医院肿瘤科上海市200062 

基　　金：国家自然科学基金资助项目 No.30600844 上海市教委第五期重点学科资助项目 No.J50304~~ 

出 版 物：《世界华人消化杂志》 (World Chinese Journal of Digestology)

年 卷 期：2008年第16卷第31期

页      码：3498-3504页

摘      要：目的:构建COX-2基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒pGL3-Basic-COX-2-promoter,并进行功能鉴定.方法:根据已知人的COX-2基因启动子序列设计两端引物,扩增人基因组DNA中的COX-2启动子.载体质粒pGL3-Basic和COX-2启动子分别用限制性内切酶HindⅢ和BglⅡ双酶切,将COX-2基因启动子插入到pGL3-Basic报告载体中.构建的pGL3-Basic-COX-2-promoter重组质粒和内参质粒pRL-SV40瞬时共转染胃癌MKN45细胞,加入100倍细胞数量的Hpylori共培养不同时间后,检测双荧光素酶的活性.结果:成功构建COX-2基因启动子重组质粒pGL3-Basic-COX-2-promoter,质粒测序及酶切结果完全正确.瞬时转染实验显示,COX-2启动子在MKN45细胞中的转录表达随时间的变化而升高,转染后40h的双报告基因活性是转染后8h的3.5倍(P<0.01);加入Hpylori共培养后,同时间点的荧光素酶活性明显升高(P<0.05或0.01),转染后40h的活性是转染后8h的5倍(P<0.01).结论:pGL3-Basic-COX-2-promoter在胃癌MKN45细胞中能被转录激活,加入Hpylori刺激后COX-2活性显著增强,pGL3-Basic-COX-2-promoter可以用来鉴定和检测细胞中COX-2的水平.

主 题 词：环氧合酶2 启动子 质粒 幽门螺杆菌 双荧光素酶 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-3079.2008.31.005

馆 藏 号：203548286...