GST-Exendin-4在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

作     者：张怡 周庆峰 贾孟 张红绪 李成伟 Zhang Yi;Zhou Qingfeng;Jia Meng;Zhang Hongxu;Li Chengwei

作者机构：周口师范学院生命科学系植物遗传与分子育种重点实验室周口466001 商丘师范学院生命科学系商丘476000 河南师范大学生命科学学院新乡453007 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30901877) 河南省科技厅社会发展项目(092102310209) 河南省教育厅自然科学研究计划项目(2009B180021) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2011年第27卷第6期

页      码：155-159页

摘      要：为了制备GST-Exendin-4融合蛋白,以本实验室构建好的pET22b-Exendin-4为模板,通过PCR扩增出Exendin-4基因,酶切克隆入pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Exendin-4。经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在不同浓度的IPTG和不同温度诱导下,经SDS-PAGE分析鉴定,表达出Mr约为30 kD的目的蛋白,灰度扫描显示目的蛋白占菌体总蛋白的29.9%,超声裂解后的上清通过Sepharose 4B亲和层析纯化、透析、除盐及冷冻干燥得到高纯度的目的蛋白。本研究成功制备了高纯度的GST-Exendin-4融合蛋白,为下一步进行目的蛋白大规模的生产打下了良好的基础。

主 题 词：Exendin-4 融合蛋白 可溶表达 亲和纯化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2011.06.037

馆 藏 号：203549436...