绵羊Myostatin基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

作     者：盛鹏程 朱瑞良 苗向阳 

作者机构：山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 

基　　金：国家高科技研究发展计划(863计划)资助项目(2008AA10Z140) 转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08008-004B 2008ZX08008-003 2008ZX08006-005) 国家自然科学基金资助项目(30571339) 中国农业科学院创新基金资助项目(2004-院-1) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2012年第32卷第4期

页      码：628-632页

摘      要：针对绵羊Myostatin基因特异性序列,设计4对shRNA,并合成高表达载体。将干扰质粒和高表达载体瞬时共转染HEK293细胞,应用Real-time PCR鉴定干扰效率,将筛选到最有效的shRNA表达载体和pDONR221载体进行BP重组反应,以获得含干扰序列的入门载体。然后将含干扰序列的入门载体和慢病毒表达的目的载体pLenti6/BLOCK-iT-DEST进行LR重组反应,以获得含干扰序列的慢病毒表达载体。qPCR检测病毒物理滴度。结果本试验成功构建绵羊Myostatin基因RNAi慢病毒载体,病毒的滴度为:9.3×109 TU/mL。为研究Myostatin基因对肌肉生长的影响提供了稳定感染细胞载体。

主 题 词：RNA干扰 shRNA 肌肉生长抑制素 慢病毒 qPCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2012.04.029

馆 藏 号：203549922...