柑橘转基因成分多重PCR检测体系的建立

作     者：李政利 彭爱红 邹修平 何永睿 姚利晓 陈善春 

作者机构：西南大学园艺园林学院重庆400716 中国农业科学院柑桔研究所国家柑桔工程技术研究中心国家柑桔品种改良中心重庆400712 

基　　金：重庆市重点实验室专项(CSTC) "863"科技部农村领域国家科技计划课题(2011AA100205) 农业部/公益性行业(农业)科研专项(201003067) 教育部科学技术研究重点项目(109131) 

出 版 物：《安徽农业科学》 (Journal of Anhui Agricultural Sciences)

年 卷 期：2012年第40卷第16期

页      码：8845-8849页

摘      要：[目的]建立柑橘转基因成分的多重PCR检测体系。[方法]根据GenBank中pBI121质粒序列和柑橘(Citrus.)Actin基因序列,分别设计CaMV35S启动子、NOS启动子、NOS终止子特异引物和Actin基因的特异引物,建立能同时检测出4种序列的多重PCR检测体系,同时通过正交试验确定该体系的最佳引物浓度和比例及PCR反应体系中各因素的浓度及反应程序,并对该方法的灵敏度进行验证。[结果]试验得到的最佳MPCR反应体系为:10×buffer 2.5μl,25 mmol/L MgCl22.0μl;dNTP Mixture(2.5 mmol/L each)2.0μl,10μmol/L的Actin基因、35S启动子、NOS启动子、NOS终止子引物分别加入1.0、1.0、1.5、0.5μl,模板DNA 0.1μg,Taq DNA聚合酶1.25U,加ddH2O至25μl。PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃30 s,64.1℃45 s,72℃50 s,31个循环;72℃10 min。试验中,经正交优化后的4重PCR反应灵敏度达0.1%。[结论]该研究建立的MPCR检测体系,理论上已能满足柑橘或其深加工产品的转基因成分检测。

主 题 词：多重PCR 正交试验 检测 转基因成分 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 0828[工学-建筑类] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0517-6611.2012.16.018

馆 藏 号：203549996...