RNAi技术体外沉默肌肉环指蛋白1的研究

作     者：朱志祥 梁炳生 冯勇 达志峰 丁洁 韦建 贾英伟 ZHU Zhi-xiang;LIANG Bing-sheng;FENG Yong;DA Zhi-feng;DING Jie;WEI Jian;JIA Ying-wei

作者机构：山西医科大学第二医院骨科太原030001 上海市第六人民医院骨科 

基　　金：国家自然科学青年基金(81000805) 

出 版 物：《中华细胞与干细胞杂志（电子版）》 (Chinese Journal of Cell and Stem Cell（Electronic Edition）)

年 卷 期：2013年第3卷第2期

页      码：20-24页

摘      要：目的探讨RNAi技术体外抑制大鼠肌肉环状指蛋白1(MuRF-1)基因表达的效果,筛选出针对MuRF-1基因最有效的siRNA重组质粒。方法根据大鼠MuRF-1基因的mRNA序列,设计4组干扰序列,即siRNA MuRF1-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,利用lipofactamine2000转染试剂将siRNA重组质粒转染大鼠成肌细胞系L6,于转染后48 h与72 h,采用实时定量PCR和Western blot或免疫印迹检测其对MuRF-1表达的抑制效果。MuRFl基因siRNA重组质粒瞬时转染后mRNA和蛋白质数据以x±s表示。对照组与四组实验组的比较用单因素方差分析;多个样本均数的两两比较用LSD检验。结果(1)实时定量PCR显示四组干扰质粒MuRF1-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ对基因MuRF-1的mRNA的抑制率在转染后48 h分别为67﹪、31﹪、11﹪,20﹪,不同干扰序列的抑制效果有差异(F=4.527,P=0.024);72 h分别为79﹪、59﹪、50﹪和61﹪,不同干扰序列的抑制效果有差异(F=19.088,P0.05)。四对序列中,以siRNAMuRF1-Ⅰ的抑制效果最为明显。蛋白水平的抑制效果与mRNA水平基本一致。结论成功筛选出对MuRF-1基因有效的siRNA重组质粒,即siRNA MuRF1-Ⅰ,为通过RNAi技术进一步研究其功能以及基因靶向治疗奠定了基础。

主 题 词：成肌细胞 L6 MuRF-1 质粒转染 RNA干扰 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3877/j.issn.2095-1221.2013.02.005

馆 藏 号：203550566...