小鼠肝炎病毒反向斑点杂交检测方法的建立及初步应用

作     者：赵婷婷 严磊 魏立雯 韦莉 王会娟 谭毅 赖国旗 Zhao Tingting;Yan Lei;Wei Liwen;Wei Li;Wang Huijuan;Tan Yi;Lai Guoqi

作者机构：重庆医科大学实验动物中心重庆400016 泸州医学院科技处实验动物中心四川泸州646000 重庆市中药研究院重庆400065 

基　　金：重庆市科委科技创新能力建设项目(CSTC2010CB5013)~~ 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2014年第36卷第16期

页      码：1679-1683页

摘      要：目的建立一种反向斑点杂交方法(reverse dot blots,RDB)以检测小鼠肝炎病毒。方法用MHV四个毒株分别感染L929细胞,收获病毒提取RNA并逆转录成cDNA;根据MHV保守区基因组序列设计引物和探针,将上游引物5 端用生物素标记。进行PCR扩增,应用PCR产物进行反向斑点杂交,优化杂交条件,进行稳定性、特异性和灵敏度实验,建立反向斑点杂交法。用此法和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对41只小鼠进行检测。RDB检测结果阳性样本进行T载体克隆测序。结果试剂条4℃保质期为8个月。分别检测MHV、金黄色葡萄球菌、沙门菌和乙型肝炎病毒,仅MHV为阳性,RDB特异性为100%,且MHV PCR产物最低检测限为5 ng/μL。41只小鼠经本方法检测后,有5只MHV阳性,分布于3个群,而ELISA检测结果有5只阳性,分布于2个群,阳性样本T载体克隆测序结果与RDB检测结果一致。结论该方法具有简洁明了、稳定可靠、特异性好、灵敏度高等优点,可应用于实验动物小鼠肝炎病毒的检测。

主 题 词：MHV 实验动物 反向斑点杂交 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.16016/j.1000-5404.2014.16.008

馆 藏 号：203551118...