腺病毒载体介导的siRNA对3T3-L1细胞脂联素表达的影响

作     者：孟凡萍 杨刚毅 李钶 李伶 齐晓亚 刘建雷 李荣 MENG Fan-ping;YANG Gang-yi;LI Ke;LI Ling;QI Xiao-ya;LIU Jian-lei;LI Rong

作者机构：重庆医科大学：医学检验系临床生物化学教研室重庆400010 重庆医科大学：附属第二医院内分泌科重庆400010 

基　　金：国家自然科学基金(30771037,30270631,30370671) 国家教育部“春晖计划”(2003-56) 美国NIH基金(R01HL073267,DK066003) 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2008年第30卷第14期

页      码：1312-1315页

摘      要：目的构建携带小鼠脂联素(Acrp30)siRNA腺病毒载体,并检测其对小鼠脂肪细胞Acrp30表达的影响。方法首先用KpnⅠ+NotⅠ双酶切本课题组前期构建的质粒pSilencer1.0-U6-Acrp30-1和pSilencer1.0-U6-Acrp30-3,得到目的片段U6-Acrp30-1和U6-Acrp30-3,并将目的片段亚克隆入穿梭质粒pShuttle,用PmeⅠ线性化穿梭质粒pShuttle-U6-Acrp30-1和pShuttle-U6-Acrp30-3,并与pAdeasy-1在BJ5183内同源重组,筛选、鉴定、测序后,在XL10-Gold中扩增重组腺病毒质粒,最后在293细胞内包装扩增为重组腺病毒Ad-Acrp30-1和Ad-Acrp30-3。用此重组腺病毒感染3T3-L1脂肪细胞,用RT-PCR和ELISA检测其Acrp30 mRNA和蛋白表达。结果设计并构建了小鼠Acrp30基因特异性siRNA腺病毒载体,该载体感染脂肪细胞后,能显著抑制其Acrp30 mRNA和蛋白表达。结论构建的Acrp30基因特异性siRNA腺病毒载体能有效的抑制脂联素基因在3T3-L1脂肪细胞中的表达。

主 题 词：RNA干扰 腺病毒载体 脂联素 3T3-L1细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 100101[100101] 071007[071007] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-5404.2008.14.003

馆 藏 号：203555761...