DNA甲基转移酶RNAi干涉载体的构建及其鉴定

作     者：王志伟 于小青 郭兴东 邝美华 余龙江 栗茂腾 付春华 WANG Zhi-wei;YU Xiao-qing;GUO Xing-dong;KUANG Mei-hua;YU Long-jiang;LI Mao-teng;FU Chan-hua

作者机构：华中科技大学生命科学与技术学院资源生物学与生物技术研究所湖北武汉430074 

基　　金：国家自然科学基金资助(200906036和20776058) 

出 版 物：《现代生物医学进展》 (Progress in Modern Biomedicine)

年 卷 期：2010年第10卷第17期

页      码：3201-3204页

摘      要：DNA甲基化(DNA Methylation)是真核生物基因组最常见的DNA共价修饰形式,影响蛋白质-DNA的相互作用,在基因表达的调控上起着重要作用。RNAi(RNA interference)干涉是关闭特定基因功能的新技术,在植物功能基因组、植物发育及生理代谢途径调控等方面有着广泛应用。本文根据植物DNA甲基转移酶(DNMTs)的保守序列设计引物,首先从拟南芥总基因组DNA中克隆出DNA甲基转移酶基因保守片段,然后以此保守片段为模板扩增长度约570bp的靶序列用于构建RNAi载体。根据RNAi作用机制,将570bp靶序列正向、反向连接到pHANNIBAL载体上,然后将带有此反向重复结构的完整ORF框连接到植物表达载体pGreeII上,经过酶切鉴定和测序分析证实DNA甲基转移酶RNAi重组表达载体构建成功。转化红豆杉细胞表明该干涉载体具有生物学功能,为研究受DNA甲基化调控的性状改良打下基础。

主 题 词：DNA甲基化转移酶 RNAi 载体构建 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 

D　O　I：10.13241/j.cnki.pmb.2010.17.015

馆 藏 号：203557356...