旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因的克隆与原核表达

作     者：盖文燕 李文卉 王鸿盛 姚菊霞 曲自刚 王艳华 张德林 付宝权 

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 

基　　金：国家"十一五"科技支撑计划项目(2007BAD40B03) 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(0032007012) 甘肃省科技重大专项(0702NKDA039) 教育部留学回国人员科研启动基金资助项目 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2010年第40卷第5期

页      码：470-474页

摘      要：根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Tsserpin)基因序列设计1对引物,从旋毛虫肌幼虫提取总RNA,应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,进行限制性酶切后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-Tsserpin,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,经PCR、限制性酶切分析及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行了诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物,表达产物纯化后用Western-blotting鉴定Tsserpin重组蛋白的抗原性。PCR与酶切鉴定结果显示,构建的重组表达质粒pET30a-Tsserpin与预期结果一致。测序结果表明,插入片段为1122bp,编码373个氨基酸,与GenBank中旋毛虫Tsserpin基因的相似性为99%。含有pET30a-Tsserpin重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE分析结果显示,表达产物的分子质量约为48.5ku,而且主要以包涵体形式存在。Western-blot分析结果表明Tsserpin重组蛋白可以被旋毛虫感染猪阳性血清特异性识别,提示其具有良好的抗原性,可以作为猪旋毛虫病免疫诊断的候选抗原。

主 题 词：旋毛虫 丝氨酸蛋白酶抑制因子 重组蛋白 抗原性 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2010.05.018

馆 藏 号：203558262...