快速检测单核细胞增生李斯特菌LAMP方法的建立

作     者：姚栋 张如胜 欧新华 宋克云 YAO Dong;ZHANG Ru-sheng;OU Xin-hua;SONG Ke-yun

作者机构：长沙市疾病预防控制中心微生物检验科湖南长沙410001 

出 版 物：《江苏大学学报（医学版）》 (Journal of Jiangsu University：Medicine Edition)

年 卷 期：2012年第22卷第5期

页      码：394-397页

摘      要：目的:建立一种检测单核细胞增生李斯特菌核酸的快速、特异的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermalamplification,LAMP)方法。方法:针对单核细胞增生李斯特菌的李斯特菌溶血素hlyA基因设计4条LAMP引物,在水浴箱内65℃保温约60 min,完成对单核细胞增生李斯特菌的扩增,扩增产物经肉眼、SYBR Green I染色和电泳鉴定。利用LAMP和PCR方法同时检测1株单核细胞增生李斯特菌和10株非单核细胞增生李斯特菌(对照组)来验证LAMP方法的特异性。用LAMP和PCR方法分别检测一系列稀释后的单核细胞增生李斯特菌菌液,比较两者的敏感性。结果:经肉眼、加染料和电泳均能观察到1株单核细胞增生李斯特菌LAMP扩增阳性反应,10株非单核细胞增生李斯特菌没有出现LAMP扩增。LAMP敏感度比PCR高,LAMP检测单核细胞增生李斯特菌的检测下限为3 cfu/ml,PCR检测下限>300 cfu/ml。LAMP检测速度比PCR更快,只需要60 min。结论:建立了一种检测单核细胞增生李斯特菌的快速、特异的LAMP方法。

主 题 词：环介导等温扩增 单核细胞增生李斯特菌 溶血素基因 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.13312/j.issn.1671-7783.2012.05.001

馆 藏 号：203558362...