禽内源性反转录病毒ALVE表观遗传学分析方法的建立及应用

作     者：朱文奇 胡序明 陈世豪 刘洋洋 孙振 耿拓宇 宋成义 高波 王宵燕 秦爱建 崔恒宓 

作者机构：扬州大学表观遗传学及表观基因组学研究所扬州225009 扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 

基　　金：国家973项目(2012CB517605) 国家自然科学基金项目(81171965 81372237 91540117) 江苏省畜牧学优势学科项目 中国博士后科学基金第57批面上资助项目(2015M571828) 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2015年第23卷第5期

页      码：15-20页

摘      要：根据NCBI公布的禽内源性反转录病毒ALVE1序列设计引物,以SPF鸡胚制备的成纤维细胞为生物材料,建立了ALVE基因序列分析、甲基化水平和转录表达检测方法。以鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast cell,CEF)和巨噬细胞系(HD11)两种细胞的基因组为模板,通过常规PCR扩增获得了1912 bp的扩增产物,测序后与内源性ALVE1序列比对,核苷酸同源性高达98%以上,说明扩增产物为内源性病毒序列。同时,利用焦磷酸测序分析LTR片段甲基化水平,结果显示,LTR在非免疫细胞CEF中的甲基化水平显著高于巨噬细胞系HD11。利用常规RT-PCR和荧光定量PCR在两种细胞均检测到禽内源性反转录病毒LTR基因、gag基因、pol基因和env基因的转录表达。本研究为今后分析禽内源性反转录病毒ALVE功能提供了方法,同时也为深入研究禽内源性反转录病毒ALVE表观遗传学调控机制奠定了基础。

主 题 词：禽内源性反转录病毒 DNA甲基化 表观遗传学 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-6422.2015.05.003

馆 藏 号：203558427...