突触小泡膜蛋白VAMP-2的原核表达、纯化及活性鉴定

作     者：罗森 王琴 房华丽 王德慧 李崭 李涛 王慧 LUO Sen;WANG Qin;FANG Hua-li;WANG De-hui;LI Zhan;LI Tao;WANG Hui

作者机构：安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31201352) 

出 版 物：《军事医学》 (Military Medical Sciences)

年 卷 期：2013年第37卷第4期

页      码：250-253页

摘      要：目的克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性。方法根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因。将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序列的原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定,并利用金属内肽酶BoNT/B轻链对该蛋白进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论成功构建pET-22b-VAMP-2表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta,Western印迹证实重组蛋白VAMP-2(残基Met 1-Met 94)获得可溶性表达。重组蛋白VAMP-2可被金属内肽酶BoNT/B特异性酶解,具有良好的生物学活性。

主 题 词：囊泡相关膜蛋白质2 金属内肽酶 底物 原核表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.7644/j.issn.1674-9960.2013.04.003

馆 藏 号：203565717...