分泌型毕赤酵母人全长抗体库的构建与鉴定

作     者：刘强 张晶 张小爱 杨小盼 华玲 高新 付洁 宋海峰 

作者机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 

基　　金：北京市基金(5113034) 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2014年第30卷第1期

页      码：58-62页

摘      要：目的基于N-糖基化部分改造毕赤酵母构建表达分泌型人全长抗体库。方法基于酵母分泌型表达载体pPICZαA构建双启动子串联表达重链和轻链恒定区基因的载体pPICZαA-C H-C L,经基因序列分析和Western blot分析验证。设计44对简并引物经逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增获得轻链可变区V L和重链可变区V H基因库。通过PCR将其插入上述恒定区表达载体构建全长抗体表达库pPICZαA-V H-C H-V L-C L。将该库电转化N-糖基化部分改造后宿主菌株GS115Y。随机挑取20个平板克隆进行菌液PCR鉴定、基因分析,并提交IgBLAST-imgt数据库鉴定抗体库正确性与多样性。结果获得表达重链和轻链恒定区的表达载体pPICZαA-C H-C L,并在此基础上初步获得全长抗体表达库pPICZαA-V H-C H-V L-C L,库容量为105。结论成功构建了分泌型N-糖基化毕赤酵母人全长抗体库。

主 题 词：毕赤酵母 人全长抗体 N-糖基化改造 抗体库 分泌表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071001[071001] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13423/j.cnki.cjcmi.008311

馆 藏 号：203566024...