慢病毒介导的GSK-3β基因稳定沉默表达的SH-SY5Y细胞系建立

作     者：边红 边卫 孙金波 李严霜 陈雯 BIAN Hong;BIAN Wei;SUN Jin-bo;LI Yan-shuang;CHEN Wen

作者机构：山东大学附属济南市中心医院神经内科山东济南250013 济南市第四人民医院内分泌科山东济南250031 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No:30970989) 

出 版 物：《中国现代医学杂志》 (China Journal of Modern Medicine)

年 卷 期：2014年第24卷第6期

页      码：14-18页

摘      要：目的构建靶向糖原合成激酶3β(GSK-3β)基因的RNA干扰慢病毒载体,建立其对GSK-3β基因沉默表达的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的细胞系模型。方法根据GSK-3βmRNA序列设计合成靶向目的基因的短发夹状RNA(shRNA)序列并构建慢病毒表达载体,经酶切和测序鉴定,将慢病毒重组载体与包装载体共转染293T细胞,获得纯化浓缩病毒液,侵染SH-SY5Y细胞,采用绿色荧光示踪观察细胞的转染情况,设为慢病毒干扰组(实验组)、阴性对照组(Lenti-NC组)、空白对照组(Blank组),利用qRT-PCR和Western blot法检测GSK-3βmRNA和蛋白表达水平。结果成功构建了靶向GSK-3β的shRNA慢病毒,重组慢病毒转染人SH-SY5Y细胞,72 h后观察转染效率达90%以上,与对照组比较,靶基因变化结果显示,实验组中GSK-3βmRNA和蛋白的表达均显著降低(均P<0.01)。结论有效建立慢病毒介导的GSK-3β基因稳定沉默表达的SH-SY5Y细胞模型,为体外评价研究GSK-3β沉默后药物或行为治疗AD提供试验工具细胞模型。

主 题 词：阿尔茨海默病 慢病毒属 RNA干扰 糖原合成激酶-3β 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100205[100205] 10[医学] 

馆 藏 号：203566105...