用于异种移植的新型基因改造猪的培育

作     者：李倩坤 王盈 张曼玲 杨海元 程俊霖 赵丽华 任子健 陈凤娇 万振昆 张纬 李荣凤 戴一凡 Li Qiankun;Wang Ying;Zhang Manling;Yang Haiyuan;Cheng Junlin;Zhao Lihua;Ren Zijian;Chen Fengjiao;Wan Zhenkun;Zhang Wei;Li Rongfeng;Dai Yifan

作者机构：南京医科大学基础医学院江苏省异种移植重点实验室210029 南京医科大学附属南京医院临床药理科 

基　　金：江苏省科技厅江苏省异种移植重点实验室专项经费(BM2012116) 

出 版 物：《中华移植杂志（电子版）》 (Chinese Journal of Transplantation(Electronic Edition))

年 卷 期：2014年第8卷第2期

页      码：33-38页

摘      要：目的培育用于异种移植的新型基因改造猪,在α-Gal基因敲除以及膜辅蛋白CD46、血栓调节蛋白(TM)基因转入的基础上,进一步将Ⅱ类反式激活因子基因N端缺失显性负向(CⅡTA-DN)基因转入猪胎儿成纤维细胞,以抑制猪白细胞抗原(SLA)Ⅱ类分子的表达。方法设计合成博来霉素(Zeocin)抗性基因片段,并将其与含有CⅡTA-DN基因的pST205载体连接,构建置于人Tie2增强子和CMVβ-actin启动子下游的pNMU105/CⅡTA-DN表达载体,将线性化的pNMU105通过脂质体转染法转入已经敲除了α-Gal并转入CD46、TM基因的猪胎儿成纤维细胞181B(DKO/CD46/TM)。Zeocin抗性筛选转染pNMU105质粒的181B细胞,PCR方法检测CⅡTA-DN基因在181B细胞中的转入,获得阳性单克隆并进行核移植,得到DKO/CD46/TM/CⅡTA-DN转基因猪。取仔猪的耳缘组织裂解后进行基因鉴定。结果成功设计Zeocin抗性基因片段并构建pNMU105/CⅡTA-DN表达载体,经过质粒转染和Zeocin抗性药物筛选获得多株阳性单克隆,顺利通过核移植得到转基因猪。仔猪耳缘组织经PCR鉴定,在592 bp位置检测到预期条带,证明均为CⅡTA-DN转基因阳性。结论通过新型基因改造猪的培育,在抑制超急性排斥反应和补体反应、降低凝血和人CD4+T细胞免疫反应的理论基础上进行了转基因模型猪的构建,为异种移植中更加有效地减少免疫损伤、提高移植器官的存活做出了新的尝试。

主 题 词：Ⅱ类反式激活因子 显性抑制基因 猪白细胞抗原 异种移植 转基 因猪 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 

D　O　I：10.3877/cma.j.issn.1674-3903.2014.02.008

馆 藏 号：203566215...