短发夹RNA表达载体对2型单纯疱疹病毒UL54基因的干扰效应

作     者：吕延成 潘晓瑜 樊俊 黄畅 L(U) Yan-cheng;PAN Xiao-yu;FAN Jun;HUANG Chang

作者机构：遵义医学院珠海校区生物化学与分子生物学教研室广东省珠海市519041 

基　　金：贵州省科学技术基金项目(黔科合J字2313号) 

出 版 物：《中国临床研究》 (Chinese Journal of Clinical Research)

年 卷 期：2014年第27卷第8期

页      码：901-903,906,F0002页

摘      要：目的研究短发夹核糖核酸(shRNA)表达载体对2型单纯疱疹病毒(HSV-2)UL54基因的干扰效应。方法针对HSV-2 UL54基因,构建5个靶向HSV-2 UL54基因的短发夹RNA重组表达载体(shRNA1081、shRNA1092、shRNA1276、shRNA1407、shRNA1508),同时设计不针对任何基因的序列为阴性对照组(阴性对照组)及不加任何重组表达载体的空白对照(空白对照组)。重组表达载体通过脂质体转染人胚胎肾细胞(HEK293)后接种HSV-2,48 h后利用荧光定量RT-PCR检测各组细胞UL54 mRNA的表达水平,终点滴定法测定HSV-2子代病毒滴度。结果荧光定量RT-PCR结果示,与空白对照组相比,shRNA1081、shRNA1407和shRNA1508能够降低HSV-2 UL54 mRNA的表达水平(P均<0.01);对UL54基因的抑制率在阴性对照组(加shRNA NC)、shRNA1081组、shRNA1407组、shRNA1508组分别为7%、69%、56%及55%,以shRNA1081组为最高。终点滴定法结果示,与空白对照组比较,shRNA 1081组、shRNA 1407组、shRNA 1508组病毒滴度不同程度下降(P均<0.01)。结论成功构建UL54 shRNA重组表达载体,shRNA1081、shRNA1407、shRNA1508能在体外细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL54基因表达,从而抑制HSV-2在HEK293细胞中的复制。

主 题 词：短发夹核糖核酸 核糖核酸干扰 2型单纯疱疹病毒 UL54基因 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.13429/j.cnki.cjcr.2014.08.002

馆 藏 号：203566435...