pB2R-Venus重组真核载体的构建及在HEK293T细胞中的表达

作     者：季丙元 程葆华 王春梅 陈京 白波 

作者机构：济宁医学院神经生物学研究所山东济宁272067 山东农业大学生命科学学院山东泰安272018 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.31271243 No.81070961) 山东省自然科学基金资助项目(No.ZR2011CM027 No.ZR2009DZ004) 泰山学者建设专项资金 

出 版 物：《济宁医学院学报》 (Journal of Jining Medical University)

年 卷 期：2014年第37卷第5期

页      码：309-312页

摘      要：目的构建带有黄色荧光蛋白突变体Venus标签的人缓激肽2型受体(bradykinin receptor 2,B2R)真核表达载体,用于B2R与相关受体及蛋白的相互作用、B2R受体介导的信号转导机制的研究等。方法根据人B2R基因序列设计引物,以质粒pcDNA3.1-B2R为模板,PCR扩增目的基因人B2R。EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切扩增产物及质粒pVenus-N1,经回收、连接、转化,获取重组质粒。对重组质粒进行酶切、测序鉴定。转染重组质粒至HEK293T细胞,荧光显微镜观察受体B2R的细胞定位,蛋白印迹法检测目的蛋白人B2R蛋白的表达。结果 PCR扩增出了1条长度为1176bp的基因片段,测序结果与GenBank(AY275465)相同。荧光显示B2R表达于质膜。Western blot结果显示,实验组蛋白印迹条带与目的蛋白大小相同,为44kDa。结论成功构建了pB2R-Venus重组真核表达载体,瞬时转染成功,获得了转染有重组质粒的HEK293T细胞。成功构建的重组质粒pB2R-Venus可用于后续BRET、FRET等实验研究,有助于B2R介导的信号转导机制的探讨和药物靶点的寻找。

主 题 词：真核表达载体 HEK293T细胞 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-9760.2014.05.002

馆 藏 号：203566498...