靶向神经上皮细胞转化因子-1和血管内皮细胞生长因子基因的双靶小干扰RNA干预肺腺癌A549细胞的研究

作     者：乔羽 仲崇俊 陈莉 夏春秋 黄海涛 Qiao Yu;Zhong Chongjun;Chen Li;Xia Chunqiu;Huang Haitao

作者机构：南通大学第二附属医院心胸外科江苏226001 南通大学医学院病理学系 

基　　金：江苏省卫生厅指导性科研项目(Z201223) 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2014年第31卷第11期

页      码：2476-2479页

摘      要：目的 观察同时下调神经上皮细胞转化因子-1（NET-1）和血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因对非小细胞肺癌细胞生物学行为及血管形成的影响.方法 分别设计与合成靶向NET-1和VEGF的单靶小干扰RNA（NET-1 siRNA和VEGF siRNA）和双靶siRNA（DGT siRNA）,转染肺腺癌A549细胞.实时定量荧光聚合酶链反应（RT-qPCR）、Western blot分别检测靶基因NET-1和VEGF mRNA、蛋白的表达水平;噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,Hoechst染色法检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞的迁移侵袭能力.提取转染48 h后A549细胞的上清液,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清液中VEGF的含量,用上清液孵育人血管内皮细胞（HUVECs）,观察其管形成能力,检测siRNA干预癌细胞后对血管形成的抑制作用.结果 与未处理组（100.0％）比较,NET-1 mRNA转录和蛋白表达水平在DGT siRNA组[（47.9±3.9）％、（28.3±2.2）％]和NET-1siRNA组[（35.8±5.1）％、（38.2±1.6）％]均有明显下调;VEGF基因mRNA转录和蛋白表达水平在DGTsiRNA组[（53.3±5.6）％、（42.9±5.0）％]及VEGFsiRNA组[（49.4±1.6）％、（18.5±9.9）％]比较未处理组（100.0％）亦有明显下调（P ＜0.05）;MTT实验显示单、双靶siRNA在不同时间点均能明显抑制细胞增殖,且DGTsiRNA组效应明显优于单靶组（P＜0.05）;Transwell实验中DGTsiRNA组穿膜细胞数[（25.63±7.27）个/视野]明显少于NET-1[（35.70±7.15）个/视野]和VEGF[（28.00 ±4.90）个/视野],两个单靶组差异有统计学意义（P＜0.05）;Hoechst染色显示双靶siRNA组细胞凋亡比例[（43.6±5.0）％]明显高于NET-1[（18.4±4.8）％]和VEGF[（9.6±7.2）％]单靶组（P＜0.05）;DGT siRNA组细胞培养上清中VEGF浓度[分别为（22.12±4.23） ng/L、NET-1单靶组（108.00±12.10） ng/L、VEGF单靶组（35.56 ±7.40） ng/L]明显低于对照组[（122.00±10.31） ng/L],HUVEC成管数在DGT siRNA组[（32.67±4.50）个]、NET-1[（48.33±3.50）个]和VEGF[（33.20 ±2.65）个]中,两个单靶组明显低于未处理组[（73.43±4.58）个]（P＜0.05）,且DGTsiRNA组优于单靶组.结论 同时下调NET-1和VEGF基因可明显抑制肺癌细胞生物学行为及血管形成,效果显著优于单基因调控.

主 题 词：RNA干扰 肺癌 神经上皮细胞转化因子1 血管内皮细胞生长因子 双靶 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2014.11.037

馆 藏 号：203566528...