蓖麻蚕微孢子虫孢壁蛋白NpSWP12基因的克隆分析与原核表达

作     者：朱峰 肖圣燕 张永红 唐芬芬 邵榆岚 陈世良 白兴荣 ZHU Feng;XIAO Sheng-yan;ZHANG Yong-hong;TANG Fen-fen;SHAO Yu-lan;CHEN Shi-liang;BAI Xing-rong

作者机构：云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所云南蒙自661101 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.31260583) 云南省现代农业蚕桑产业技术体系项目(No.2013KJTX006) 现代农业产业技术体系建设专项项目(No.CARS-22-SYZ27) 云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所青年创新基金项目(No.QC2015001) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2015年第10卷第11期

页      码：980-985页

摘      要：目的克隆并表达蓖麻蚕微孢子虫孢壁蛋白NpSWP12。方法根据家蚕微孢子虫基因组数据库信息设计简并引物进行PCR扩增,克隆得到蓖麻蚕微孢子虫孢壁蛋白NpSWP12基因。利用生物信息学软件对NpSWP12的基因与蛋白序列进行分析与结构功能预测。将该蛋白基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,转化表达载体至大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE与Western blot检测。结果蓖麻蚕微孢子虫孢壁蛋白NpSWP12基因长687bp,编码228个氨基酸残基(基因登录号:KT287071),预测蛋白质分子质量单位为26.6ku,等电点(pI)为5.96。蓖麻蚕微孢子虫孢壁蛋白NpSWP12基因结构为单外显子结构,编码的蛋白中α螺旋占77.19%。该编码蛋白含有1个BAR结构域(Bin/Aphiphysin/Rvs domain),属BAR结构域蛋白质超家族成员。NpSWP12与家蚕微孢子虫孢壁蛋白NbSWP12核苷酸序列序列相似性为95.2%,氨基酸序列相似性为96.9%。表达载体NpSWP12/pET-30a(+)转入BL21(DE3)菌株,IPTG诱导,得到的重组蛋白rNpSWP12与理论蛋白分子质量大小(30ku)相符。Western blot鉴定。结论成功克隆了蓖麻蚕微孢子虫孢壁蛋白NpSWP12基因,构建的NpSWP12/pET-30a(+)重组原核表达载体表达预期分子质量的融合蛋白,该蛋白能被相应抗体识别,为进一步研究NpSWP12的细胞定位和功能奠定了基础。

主 题 词：蓖麻蚕微孢子虫 孢壁蛋白 序列分析 原核表达 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.151105

馆 藏 号：203566924...