促血小板生成素模拟肽二联体连接肽的筛选

作     者：王海晴 史彦斌 支德娟 王亚军 李红玉 王燕萍 WANG Hai-qing;SHI Yan-bin;ZHI De-juan;WANG Ya-jun;LI Hong-yu;WANG Yan-ping

作者机构：兰州大学药学院甘肃兰州730000 兰州大学生命科学学院甘肃兰州730000 

基　　金：科技部国家国际科技合作专项项目(No.2012DFA30480) 甘肃省科技重大专项计划项目(No.1002WKDE55) 兰州市科技计划项目(2010-1-154) 

出 版 物：《药物生物技术》 (Pharmaceutical Biotechnology)

年 卷 期：2016年第23卷第2期

页      码：99-102页

摘      要：比较不同Linker连接的促血小板生成素模拟肽二联体(d TMP)的生物活性,筛选高生物活性d TMP的Linker设计。全基因合成4个d TMP基因,将片段克隆到p GEX-4T-1载体,构建重组表达载体p GEX-4T-1/d TMP,筛选阳性目的克隆,转化大肠杆菌BL21(DE3),0.1 mmol/L IPTG诱导表达融合蛋白。超声细胞破碎仪破菌,Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析获得GST-d TMP融合蛋白,凝血酶酶切,再次亲和层析除去GST标签,收集目的 d TMP肽片段,双荧光素酶法检测各目的肽片段的活性。通过实验,正确构建了4个不同的p GEX-4T-1/d TMP表达载体,经表达纯化得到了GST-d TMP融合蛋白,酶切后再次亲和层析纯化,并获得了相对分子质量与理论值3 920,3 640,3 610,3 430相符的4个d TMP肽片段,它们的活性大小依次为:d TMP-Linker3>d TMP-Linker4>d TMP-Linker1>d TMP-Linker2。实验发现,不同的连接肽显著影响d TMP肽片段的生物活性,该实验成功筛选到了活性较高的连接肽Linker3。

主 题 词：促血小板生成素模拟肽 融合蛋白 原核表达 双荧光素酶检测 亲和层析 生物活性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 

D　O　I：10.19526/j.cnki.1005-8915.2016.02.002

馆 藏 号：203567113...