RPL23编码基因的克隆及其正反义核酸转染胃癌细胞

作     者：翟惠虹 时永全 郭新宁 王新 兰梅 杨力 樊代明 

作者机构：宁夏医学院附属医院消化内科宁夏银川750004 第四军医大学西京医院全军消化病研究所陕西西安710033 

基　　金：国家自然科学重点基金资助项目 ( 30 0 30 14 0 ) 

出 版 物：《第四军医大学学报》 (Journal of the Fourth Military Medical University)

年 卷 期：2002年第23卷第16期

页      码：1507-1510页

摘      要：目的　扩增人核糖体蛋白 L 2 3(RPL 2 3)编码基因序列 ,构建其正、反义真核表达载体 ,分别转染胃癌细胞SGC790 1及胃癌长春新碱耐药细胞 SGC790 1 /VCR,以进一步研究 RPL2 3基因与胃癌多药耐药的关系 .方法　按文献报道的 RPL 2 3核苷酸序列设计合成 PCR引物 ,利用总 RNA抽取试剂盒从人胃癌长春新碱耐药细胞 SGC790 1 /VCR中提取细胞总 RNA,反转录合成 c DNA,再用 PCR方法扩增目的基因序列 .PCR产物经 DNA序列测定证实后 ,通过双酶切 ,将所获目的基因分别按正、反两个方向定向克隆入真核表达载体 pc DNA3.1 (+)中 ,酶切电泳鉴定 .采用脂质体介导的方法将 pc DNA3.1 (+) - RPL 2 3转染 SGC790 1细胞 ,pc DNA3.1(+) - an RPL2 3转染 SGC790 1 /VCR细胞 ,经 G41 8筛选后 ,随机挑选细胞克隆 .通过斑点杂交检测正、反义转染后 RPL2 3m RNA表达水平的变化 .结果　应用 RT- PCR反应扩增获得大小约 0 .5 kb的特异性片段 .经 DNA序列分析 ,证实与文献报道的人 RPL2 3编码区序列一致 .重组正义真核表达载体 pc DNA3.1 (+) - RPL2 3双酶切产生大小约 5.4kb,0 .5kb的片段 ;重组反义真核表达载体 pc DNA3.1 (+) - an RPL2 3双酶切产生大小约 5.4kb,0 .5kb的片段 ,均与预期结果相符 .转染细胞经筛选后 ,随机挑选 。

主 题 词：RPL23编码基因 反义核酸转染 基因克隆 聚合酶链反应 胃癌细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-2790.2002.16.020

馆 藏 号：203567152...