凋亡抑制蛋白Livin两种异构体真核表达载体的构建及表达鉴定

作     者：孙建国 陈正堂 王志新 张青 廖荣霞 SUN Jian-guo;CHEN Zheng-tang;WANG Zhi-xin;ZHANG Qing;LIAO Rong-xia

作者机构：第三军医大学新桥医院肿瘤科全军肿瘤诊治中心 第三军医大学新桥医院核医学科重庆400037 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 

基　　金：国家自然科学基金资助青年项目(30200282) 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2005年第27卷第19期

页      码：1935-1938页

摘      要：目的构建凋亡抑制蛋白Livin两种异构体(Livinα和β)真核细胞表达载体pcDNA3.1-Livinα和pcDNA3.1-Livinβ。方法利用分子克隆技术,首先设计合成扩增Livin基因异构体全长cDNA序列的特异性PCR引物,以肺腺癌SPC-A1细胞总RNA为模板,RT-PCR获得Livin基因异构体全长cDNA序列,TA克隆将Livin全长cDNA序列克隆到T载体上,用限制性内切酶HindⅢ和XbaⅠ双酶切取所需目的片段,然后将该片段插入真核表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,最后对产生的重组子进行双酶切、PCR鉴定,并经过测序证实后,构建成为Livin基因异构体表达载体(pcDNA3.1-Livin)。电穿孔法获得稳定表达Livinα和β的A549细胞克隆,Westernblot验证Livin蛋白在转染细胞中的表达情况。结果成功获得Livinα和Livinβ全长cDNA序列,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1上;基因转染后,阳性细胞分别表达Livinα和β。结论Livin基因两种异构体真核表达载体的构建及在细胞中的表达鉴定,为进一步研究Livin异构体功能及在肺癌细胞中的抗凋亡效应奠定了基础。

主 题 词：凋亡抑制蛋白 Livin 凋亡 真核表达载体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-5404.2005.19.008

馆 藏 号：203571185...