家蝇天蚕素Cec4的原核表达与纯化

作     者：彭建 刘巍巍 吴兆颖 杨燕琴 尚小丽 吴建伟 PENG Jian;LIU Wei-wei;WU Zhao-ying;YANG Yan-qin;SHANG Xiao-li;WU Jian-wei

作者机构：贵州医科大学医药生物技术工程研究中心贵州贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院 贵州医科大学基础医学院 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81660347) 贵州省卫生计生委科学技术基金项目(No.gzwjkj2017-1-009) 贵州省"2011协同创新中心"-贵州省健康大数据协同创新中心项目(黔教合协同创新字04) 贵州省教育厅青年科技人才成长项目(黔教合KY字148) 贵州医科大学博士启动基金项目(院博合J字002号) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2019年第14卷第2期

页      码：182-185页

摘      要：目的构建家蝇天蚕素(Cecropin)Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白。方法从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克隆。用限制性内切酶BamHI和HindⅢ双酶切目的基因和质粒,构建GST表达载体pGEX 4T-1-Cec4,转化到大肠埃希菌BL-21中,利用IPTG诱导表达重组Cec4蛋白,经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳分析。结果 PCR扩增获得的Cec4基因全长为192 bp,连接到表达载体pGEX 4T-1获得重组质粒pGEX 4T-1-Cec4,转化大肠埃希菌BL-21后经30℃、0.6 mmol/L的IPTG诱导18 h,表达相对分子质量约为26×10~3上清表达的融合蛋白,亲和层析纯化后的蛋白浓度为0.117 mg/ml。结论成功构建重组质粒pGEX 4T-1-Cec4并表达和纯化获得Cec4蛋白,为其进一步研究奠定了实验基础。

主 题 词：家蝇 CEC4 克隆 原核表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13350/j.cjpb.190212

馆 藏 号：203572640...