实时荧光定量PCR检测布鲁菌的应用研究

作     者：杜清春 王鹏 董珊珊 姜海 丁奕博 杨向东 Du Qingchun;Wang Peng;Dong Shanshan;Jiang Hai;Ding Yibo;Yang Xiangdong

作者机构：云南省地方病防治所云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室大理671000 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所布病室北京102206 

基　　金：云南省医学学科带头人培养对象(D-201652) 云南省中青年学术和技术带头人后备人才培养项目(2014HB037) 

出 版 物：《中华地方病学杂志》 (Chinese Journal of Endemiology)

年 卷 期：2019年第38卷第1期

页      码：72-75页

摘      要：目的 建立一种能快速检测布鲁菌的实时荧光定量PCR(RT-PCR)初步筛查方法。 方法 根据编码布鲁菌外膜蛋白omp10和omp31的碱基序列设计4对引物和对应探针,即omp10、omp10-1、omp31和omp31-1,应用实时荧光定量PCR技术,将设计的引物和探针分别用于检测6个种类的19份已知生物型的标准布鲁菌株DNA、10份云南玉溪分离的布鲁菌株DNA和224份阴性对照菌株DNA,包括35份巴尔通体菌、103份小肠结肠炎耶尔森菌(其中包括4份O∶3型和9份O∶9型)和86份杂菌,根据检测结果评价引物和探针的特异性。 结果 omp10、omp10-1可对19种标准布鲁菌株DNA进行扩增,omp10的起峰时间和扩增曲线优于omp10-1,且omp10不能扩增阴性布鲁菌株的DNA;omp31-1可对16种标准布鲁菌株DNA进行扩增;omp31不能扩增标准布鲁菌株DNA。omp10、omp10-1和omp31-1检测10份玉溪分离的布鲁菌株,DNA的平均循环(Ct)值分别为:19.87,、19.14、17.52。 结论 omp10特异性强,只对布鲁菌有特异性扩增,可用于布鲁菌的快速检测。

主 题 词：布鲁杆菌属 RT-PCR 快速检测 omp10 特异性 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/CMA.J.ISSN.2095-4255.2019.01.018

馆 藏 号：203572641...