牛乳中蜡样芽孢杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及验证

作     者：杨健 侯婷婷 佐兆杭 郭瑜 姚笛 YANG Jian;HOU Ting-ting;ZUO Zhao-hang;GUO Yu;YAO Di

作者机构：黑龙江八一农垦大学食品学院黑龙江大庆163319 

基　　金：大庆市指导性科技计划项目(zd-2016-147) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2019年第32卷第3期

页      码：324-327,332页

摘      要：目的建立一种快速检测牛乳中蜡样芽孢杆菌的荧光定量PCR方法,并进行验证。方法根据GenBank中登录的蜡样芽孢杆菌gyrB基因序列及荧光定量PCR要求,设计合适的特异性引物,提取菌体DNA,对目的基因进行扩增及克隆;以重组质粒为模板进行荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线;以蜡样芽孢杆菌DNA为模板进行荧光定量PCR扩增,确定其扩增条件。对建立的方法进行特异性及灵敏性验证。结果建立的方法检测其他3种牛乳中常见致病菌(大肠埃希菌、志贺菌、沙门菌)未见特异性扩增,即无交叉反应;最低检出限为1×10^(-7) ng/μL。以掺入蜡样芽孢杆菌的牛乳为样品,可检测到牛乳中10. 4 CFU/mL的蜡样芽孢杆菌,优于国标方法(GB 4789. 14-2014)检测含有相同菌落数的蜡样芽孢杆菌(仅能检测到1. 04×10~2 CFU/mL)。结论建立的方法特异性强,灵敏性高,适用于快速、准确检测牛乳中的蜡样芽孢杆菌,为实验室快速检测致病菌提供了参考。

主 题 词：荧光定量PCR 蜡样芽孢杆菌 gyrB基因 

学科分类：0832[0832] 08[工学] 083203[083203] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.002520

馆 藏 号：203572892...